你是否遇到过检测实验室从某个时间开始，荧光PCR检测结果经常出现阳性，而猪群长时间观测却没有任何问题？

    你可能遇到了实验室核酸污染问题。

    实时荧光PCR技术目前被广泛运用于疾病的实验室诊断、筛查等多个方面。长期的PCR实验，造成目标DNA片段大量累积、合成，不可避免地给实验室环境带来核酸污染，由于核酸不会自动降解，因此会在实验室环境内不断积聚。

    由于实时荧光PCR技术灵敏度很高，即使少量的目标核酸片段污染，也会被检测出来，从而出现阳性结果，造成实验室检测与临床一线情况不符。

    PCR检测实验室在运行中，需要预防和消除以往实验残留的阳性核酸。

    实验室紫外照射对祛除核酸污染并不理想，不仅对照射距离和时间有要求，也仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大，而实时荧光PCR的扩增片段一般在200bp以内。

    实验室常用的核酸清除剂多为化学试剂，例如84消毒液等含氯消毒剂，其虽然对核酸祛除的效果明 显，但味道刺鼻，对实验人员不友好，而且对金属有腐蚀性，不能处理PCR仪器、移液器、核酸提取仪、离心机等精密仪器，会影响仪器寿命及精密度。下图1、2为某实验室长期使用带腐蚀性的消毒剂，导致设备出现锈蚀和故障的。

图1：生物安全柜长期使用含氯消毒剂进行消毒，导致内部生锈

图2：实验员错误的使用含氯消毒剂对PCR仪内部孔位进行消毒，导致PCR仪损坏

    国测生物经过研发，推出新一代酶解型核酸清除剂：表清。

    表清采用全能核酸酶，快速与单链、双链、线状、环状、天然或变性等各种形式的DNA或RNA进行反应，将其降解为3至5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。

  1、无毒无害、无色无味：

    表清是一款酶解型无毒害、无腐蚀、无刺激的核酸清除剂，适用于玻璃、塑料、陶瓷、橡胶、钢材和金属等多种材质，成分对人员友好。

  2、作用迅速、耐受性强：

    表清主要成分为全能核酸酶，在工作状态下，5min即可有效降解2μg的质粒DNA

  3、半衰期短、不易残留：

    表清混匀后使用，在室温下将会自然失活，不易残留。

  4、操作简单、轻松使用：

    表清混匀后直接喷洒在固相表面，或打湿一次性抹布/纱布后再擦拭精密仪器的固相表面，过5-10分钟后，可用干净抹布或纸巾擦拭。

6.1 荧光定量方法验证：

    将阳性质粒，分别与纯水、表清按200μL：200μL的模式混合，反应10min后，各组取200μL提取核酸，与阳性质粒一起进行检测，结果如下图3所示：原始的阳性质粒Ct值为22.39，纯水反应组的Ct值为22.78，表清反应组没有Ct值，说明10min内，表清已经完全将阳性质粒降解掉。

图3：表清降解阳性质粒效果图

6.2 琼脂糖凝胶方法验证

    取5μLPCR扩增产物，分别与5μL核酸清除剂、5μL纯水混合，反应10min，立即进行凝胶电泳，结果如图4所示，反应组1已经看不到明显的扩增片段，而对照组2能看到明显的600bp大小条带。

图4：表清降解PCR扩增产物效果图

图5：对实验室环境进行喷雾处理

图6：一次性纱布蘸取适量表清对离心机表面进行擦拭处理

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