公猪感染蓝耳后,精液排毒时长达70天;妊娠前期母猪感染蓝耳后导致产仔数减少;妊娠后期母猪病毒血症,发现84%的仔猪出生时就携带蓝耳病毒,出生后21d内的死亡率为54%,存活仔猪排毒期长达228天;保育或育肥感染蓝耳后,病毒血症期超过70天。蓝耳感染不同猪群后的排毒进行研究,认为缩短妊娠母猪的病毒血症期是猪场防控蓝耳的关键所在。以下是不同猪群带毒后的排毒与病毒血症期。
一、公猪精液带毒可达70天
公猪感染蓝耳病毒后,会通过精液排毒。Christopher-Hennings J对不同品系的公猪人工感染蓝耳后,测试其排毒期,结果显示:长白猪精液散毒达到70天、约克公猪散毒28天、汉普夏猪精液中带毒46天[1],如下表1-3所示。
注:使用PCR技术对精液检测,发现L68-9第70天还可以检测到病原。(文献发表的时间较早,还未使用荧光定量PCR技术,如果使用荧光定量散毒期会更长)
注:Y71-4第28天检测阳性
注:编号为H291-6的公猪,精液第46天依然排毒。
公猪感染蓝耳后,通过精液感染母猪。蓝耳病毒污染精液通过人工授精输入母猪子宫,感染子宫内膜组织,继而感染局部淋巴组织,然后沿着血管系统和淋巴系统传染PRRSV到母猪全身,母体出现病毒血症和PRRS临床症状[2]。
接种蓝耳后第2、4、6、8、10和13天每天解剖两头公猪,第3、5、7、9、17、23、30、和37天每天解剖1头公猪,取生殖道组织及精液,并在试验前、解剖时及接种病毒后采血,观察公猪病毒血症和睾丸组织中的PRRSV细胞阳性率,结果发现即使公猪病毒血症已经消失,精液仍为PRRSV阳性,附睾组织含PRRSV阳性率最高[3]。编者注:鉴于精液排毒对猪场的危害,以及公猪排毒期长的特点,蓝耳阳性猪场应密切关注公猪带猪情况和公猪精液排毒状态;外购精液需检测是否携带蓝耳病原,阴性精液方能使用。
研究者给人工授精时的后备母猪鼻腔接种PRRSV,接种病毒10d后安乐死采样检查发现胚胎数比预期(根据黄体数量预测)的少,接毒20d后采样发现试验组的死亡胚胎数比空白对照组多3倍[4]。(这也可以解释蓝耳不稳定阳性场,母猪产仔数少原因)PRRSV对怀孕早期母猪生殖系统的干扰包括返情、受胎率低、屡配不孕、流产、延迟发 情等。病毒污染精液进入子宫,可导致胚胎死亡、胚胎数减少、配种母猪出现病毒血症,进而引起妊娠早期母猪出现繁殖障碍。PRRSV对巨噬细胞中一类细胞(CD163+和 Sn+)有严格的亲嗜性,与此同时妊娠100~110d胎盘中的CD163+和Sn+细胞的数量明显高于妊娠前期和中期。妊娠后期胎盘中的易感细胞丰富也佐证了PRRSV垂直传播集中发生于妊娠后期[5]。Rowland R等研究人员在进行先天性病毒复制和PRRSV特异性抗体跟踪研究,对3头妊娠母猪在妊娠90 d鼻腔接种VR-2332,发现84%的仔猪出生时就携带蓝耳病毒,出生后21d内的死亡率为54%。部分胚胎期感染蓝耳的仔猪,其血液中有蓝耳抗体,且抗体的存在与死亡率成正相关[6]。
A:出生时血清抗体阳性,21天内死亡,括号内为死亡天数;B:出生时血清抗体阴性,21天内死亡,带*为链球菌导致死亡;
蓝耳病毒在脐带中复制。研究人员采集带毒母猪生产时的脐带,获得了24条脐带,其中18条来自于蓝耳核酸阳性胎儿,6条来自蓝耳核酸阴性胎儿。对每条脐带的横截面上进行原位杂交,以检测含有病毒细胞。15个组织横断面中发现了10个含有PRRSV 阳性细胞,表明存在被感染的细胞。下图显示了脐带横切面中PRRSV 阳性细胞的。阳性细胞通常出现在脐带组织的平滑肌区域。对6头未感染猪的脐带切片进行原位杂交,结果均为阴性[6]。
胎儿感染PRRSV是随机的。胎儿间PRRSV传播可通过携带病毒的巨噬细胞扩散或病毒粒子通过胎膜之间的接触及血管吻合等传播,由此可知,PRRSV感染胎儿是随机性的,垂直传播发生的概率与PRRSV毒力无关,但与病毒血症持续的时间有关,因此同一窝仔猪中存在死胎、木乃伊胎、弱仔猪(出生就存在病毒血症)和健康仔猪(体内检测不到PRRSV)的情况。Rowland R R R等给妊娠母猪接种蓝耳后,对蓝耳核酸阴阳性胎儿在子宫中的位置进行了统计,发现阴阳性胎儿的分布是随机的[7]。(编者注:这也可以解释为何脐带血样本采集时,需要采集所有仔猪)
Rowland R等研究人员对3头妊娠母猪在妊娠90 d鼻腔接种VR-2332,出生后检测血液核酸PRRSV阳性的仔猪,每星期采血检测核酸,最后一次检测到阳性为第228天[6]。编者注:先天带毒猪在猪群中超长时间排毒,甚至仔猪病毒血症已经消失,病毒复制水平也很低,但持续感染的仔猪仍可导致周围阴性猪感染,持续的病毒血症和继发性细菌感染会导致仔猪损失率高。先天感染猪胸腺为蓝耳最佳病毒检测部位。Rowland R 等对人工感染蓝耳后的母猪解剖,对胎儿不同组织进行检测,9/10胸腺组织可以检测到病毒,5/10胸腺组织病毒滴度大于3.0。肺脏,6/10呈阳性,且只有一个胎肺的病毒滴度大于2.0;免疫组化:结果显示胸腺阳性组织最多(10个阳性中有8个),其次是脾脏(8个阳性中有2个)和淋巴结(9个阳性中有1个)。在胸腺内,抗原阳性细胞位于髓质和皮质区(数据未显示)。肺和扁桃体未检出PRRSV抗原阳性细胞[7]。
注:胸腺检测结果(红色框)
蓝耳唾液中排毒35天。Thi T N等研究人员对实验猪人工接种蓝耳活疫苗,采集唾液、血清检测病毒排毒,结果显示:免疫活疫苗后,唾液中病毒检测情况:第三周开始,唾液检测到病毒,第8周后消失[8]。(编者注:有临床症状的猪,可以采集唾液检测蓝耳)
注:红色方框为唾液中检测到PRRSV的时间
蓝耳病毒血症期达超过70天。刘好朋等人比较了JXA1-R株和VR-2332株两种疫苗免疫后的病毒血症期,结果显示免疫疫苗70天时,血液中核酸阳性率分别为:0%(JXA1-R)、80%VR-2332,说明蓝耳病毒在血液中的散毒时间很长,JXA1-R株接种后42天依然有接近一半猪呈核酸阳性[9],如下图所示。(编者注:蓝耳病毒血症期长,可以通过采集尾根血检测猪只是否在病毒血症期)
A:JXA1-R株 B:VR-2332株 C:生理盐水
王冬梅等从病毒血症的持续时间及PRRSV的增殖规律间接评价PRRSV CH-1R弱毒株免疫效果,结果表明免疫仔猪病毒血症在7~14 d达到高峰,而后呈下降趋势,免疫接种后42 d有67%的仔猪病毒血症消失[10]。
6.1母猪感染蓝耳导致仔猪先天带毒、超长排毒,猪场蓝耳活跃的根本在于母猪带毒。控制仔猪先天带毒的关键是防止母猪感染PRRSV出现病毒血症,缩短已感染PRRSV母猪的病毒血症持续时间才能有效减少垂直传播/先天感染的发生,控制或净化猪群的PRRSV。6.2公猪感染蓝耳后,精液排毒,经人工授精输入感染母猪。公猪精液的排毒需要特别关注。蓝耳阳性的猪场,需要定期采集血液检测公猪是否感染;已感染公猪建议淘汰。6.3仔猪先天性带毒,存活率偏低,且排毒期长达228天,排毒期内感染阴性仔猪,严重影响猪场生产成绩,建议猪场淘汰该类先天带毒仔猪。6.4蓝耳病毒可以在脐带细胞中复制,通过采集仔猪脐带或脐带血检测蓝耳的垂直传播。死胎、弱仔,可以采集胸腺检测蓝耳。6.5关于缩短妊娠母猪的病毒血症期,猪场有疫苗免疫、添加药物等方案,最终的效果评价,可以通过采集加药前与加药后妊娠母猪血液,对比分析蓝耳病毒拷贝数是否降低,如蓝耳病毒含量降低明显,说明防控方案有效。