2019-08-05
正确采集、运送、接收和保存样本是获得准确、可靠检验结果的首要环节,但临床检测样本种类多样,比如检测非洲猪瘟病原学样品就包括:唾液、全血、血清、组织、蜱、环境拭子等。
不同的样品需要选择合适的前处理和核酸提取方法,除去蛋白、脂类和核酸酶等干扰核酸扩增的物质,对保证检测结果的准确性十分重要。
其中,核酸提取的成败关系到临床PCR检验的正确与否,也是最容易出问题的环节。
而核酸提取又跟样品的前处理密切相关,不同的样本类型,样品的前处理过程会有差异。
常见样品的前处理过程(简化版)
1. 唾液:取唾液样品1ml加入1.5ml离心管中,离心3分钟,沉淀杂质,取上清液200ul用于核酸提取。
2. 全血:直接从采集的血样中取200ul用于核酸提取。
3. 血浆:取1ml的抗凝血加入1.5ml离心管中,离心(3000rpm)5分钟,取上清液200ul用于核酸提取。
4. 血清:取1~2ml新鲜血液静置待血清析出或离心(3000rpm)5分钟,取上清液200ul用于核酸提取。
5. 拭子:适用于鼻拭子、肛门拭子、咽拭子、水泡拭子等。将棉拭子样本置于1.5ml离心管中;加入1ml生理盐水,生理盐水以没过棉签头为宜,浸泡并震荡1分钟。
6. 精液:新鲜采集的精液,经室温放置30min,至呈液化状态;取其中1ml加入1.5ml离心管中,反复冻融不超过3次,以裂解细胞;离心3分钟,取上清200ul用于核酸提取。
7. 病毒培养液:直接吸取200μL原液用于核酸提取;或者使用生理盐水将原液稀释1:10或1:100,取200μL用于核酸提取。
8. 活疫苗冻干粉:使用生理盐水或疫苗稀释液稀释疫苗干粉(1mL/头份),并充分摇匀,直接吸取200μL用于核酸提取;或使用生理盐水将原液稀释1:10或1:100,取200μL用于核酸提取。
9. 饲料:对饲料样本先进行物理粉碎,然后浸泡15~30分钟,离心取上清液200μL用于核酸提取。
10. 病料组织:剪取病料病变边缘部位的组织,约米粒大小,置于1.5ml离心管中,吸取200ul生理盐水加入离心管,研磨处理至组织块完全分离,补充生理盐水至500μL,充分混匀后,取200μL用于核酸提取,剩余的低温留存用于复检。
为什么要进行核酸提取?